[讨论] 母种细菌污染的原因

液体菌种一点通

有冷凝水的试管更容易出现细菌感染  为什么呢

田鸿

是的，黄老指教得对，那是个假象。PDA斜面上细菌的生长在25度下远比比食用菌菌丝生长快得多，一般24小时就可以看见细菌菌落，而这时食用菌菌丝才长几毫米，细菌菌落很容易看见，只要接种后一天检查斜面都会发现污染的斜面，有冷凝水更易发现，而且被细菌污染的斜面上，即使食用菌菌丝生长，也是长不好的，所以斜面有没冷凝水和细菌阴性污染无关，因为不会有人去使用明显有细菌菌落的斜面，除非是一些小菌种厂的劣质母种或不认识细菌菌落的栽培户才可能出现黄老说的细菌阴性污染。食用菌母种制作中，出现细菌污染情况在正确灭菌条件下大多是接种工具灼烧没到位或操作不熟练造成，一般初学者容易出现。熟练者很少出现这个细菌污染问题，更多的是出现霉菌在管口附近的，主要是曲霉、根霉以及青霉的霉菌污染。

福建老菇农

同意蕈苑意见
      我补充一点：我们所说的隐性污染，不是指试管手提灭菌锅不彻底，所造成的污染，那是属于另一个问题，我们所指出的隐性污染，而是单指在接种过程中，由于操作不当，导致接种块周围出现细菌，酵母等杂菌，由于没有仔细观察，检查，丝状真菌的菌丝将细菌和酵母菌落覆盖，再次移接，造成隐性污染。属于出发菌株污染问题。

myb

QUOTE:

以下是引用福建老菇农在2010-4-27 11:28:00的发言：
同意蕈苑意见
      我补充一点：我们所说的隐性污染，不是指试管手提灭菌锅不彻底，所造成的污染，那是属于另一个问题，我们所指出的隐性污染，而是单指在接种过程中，由于操作不当，导致接种块周围出现细菌，酵母等杂菌，由于没有仔细观察，检查，丝状真菌的菌丝将细菌和酵母菌落覆盖，再次移接，造成隐性污染。属于出发菌株污染问题。

赞成两位老师的见解！2007年我负责给某企业代做2万只黑木耳试管，出现细菌污染的都是某只原始母种出了问题。同在一超净工作台接种，为什么有的试管污染细菌严重，有的很正常，我们强调的每没接一只原始母种都要严格对接种工具进行灼烧灭菌，就是这个原因。冷凝水不是细菌的污染源这句话有理。

福建老菇农

     回答田老师，原因很简单，如果有冷疑水的试管，遇到有隐性污染的菌种，含有细菌，因为细菌有鞭毛，容易在有冷疑水的试管扩散开来，而没有冷疑水的试管就相对不容易扩散开，所以就出现好像是有冷疑水的试管容易出现细菌污染的假象。

蕈苑

 我认为：
      一、冷凝水的产生，是由于培养基中的水分受到高温由液态升华为汽态后，再经过降温，又从汽态冷却成为液态，从而附着在试管内壁与培养基表面，如同蒸馏水的产生一样，在试管内，是无菌状态的。
     二、棉塞虽然经过灭菌，但棉塞中含有大量的纤维素，当棉塞潮湿时，由试管外部也有可能感染细菌。
     三、细菌的入侵有以下途径：
       1、接种物 接种物本身含有污染源，当接种物被冷凝水接触或浸泡时，冷凝水成为细菌繁殖的温床。
       2、接种工具 接种工具灭菌不彻底，当接种工具接触冷凝水后，为冷凝水接种了细菌芽孢。
       3、接种环境 接种环境灭菌不彻底，在无菌操作时，细菌芽孢从空间进入试管，在冷凝水中繁殖。
由上所知，可采取以下措施降价或避免试管中的细菌污染：
    一、冷凝水不是细菌的污染源，所以，只要灭菌达到要求，试管中有冷凝水可以使用。
    二、棉塞改用化纤棉，即透气双过滤空气，可大大降低从棉塞的污染源。
    三、接种空间与试管灭菌一定要达到无菌要求。
    四、冷却后的试管直立放置，让冷凝水沉到试管底部。
    五、接种操作时，试管口略上扬，让冷凝水沉到试管底部，杜绝冷凝水接触接种物。
    六、接种工具一定要用酒精灯烧红、冷却后再使用。
    七、接种操作时，试管口一定要在酒精灯火焰外围2.5CM范围无菌区内，封锁外源污染 。
实践证明，如果能做到以上几点，即使是当天灭菌，当天使用，试管内有大量的冷凝水产生，也不会在试管内造成细菌污染。
    以上拙见，大家指正。

南湖春

冷凝水是蒸发了，不是吸收了。干点的培养基细菌不表现了。

lsy6560483

别的且不说，在传统的试管菌种制作中，大多使用的是棉塞封口，多少年过去了，棉塞还是试管菌种使用的主流，我们又该如何去解释呢？

lsy6560483

如果说棉塞灭菌灭不透，看来棉塞封口应该彻底被否定了。而不是单纯的有无冷凝水的问题了。

南湖春

棉塞引起细菌污染也只是一种推测。我也用棉塞，有时间我做个试验再讨论棉塞的问题。存在的不一定都是合理的。