[讨论] 母种细菌污染的原因

lsy6560483

灭菌时管内的气压和外面的气压始终是平衡的吗？那么开始时的放气也不会改变内外的气压改变吗？

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如果说棉塞是干燥灭的菌，为何人们还要强调出锅时要尽量烘干棉塞？我也试图彻底烘干棉塞，可是我也不能完全做到，只能做到减少一部分水分而已。

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南湖春老师有何高招让棉塞不湿，在此我向老师请教了。这是我很头痛的问题，一直想解决但又难做到的事情。

lineeq

假如说是操作不规范所引起的污染的话，按我自己的实验，说真的我自己都不能说服自己。至于是什么也不敢下论，但是棉塞灭菌不彻底起码在理论上说是极有可能。我想对于这个看起来好像是很小的问题假如大家都未能认清与解决的话，那谈起液体菌种就有点不实在，最起码那是在与概率在争抢，与杂菌在谈判。。。。。

南湖春

    发酵罐老师直抒己见，很是佩服，真的不要客气，那样就见外了，我想咱的目的都是相同的，想探究个道理。按照常理，我不能解释上述细菌污染的现象，所以请大家讨论，希望能有个令人信服的解释。别人说冷凝水很多但不出现细菌污染，那我就更要反思我做为什么会污染。如果只说灭菌不彻底或无菌操作方法不当总觉得不大令人信服，自认为应该有其他原因。
    “灯焰周围15公分是无菌区”我认为是编书者抄错了，试想现在很多没见过蘑菇的人都在出书，出现这种现象并不奇怪；麦粒种灭菌控制时间的问题我认为供气方式不同时间也应不同。如果是普通卧式灭菌锅灭菌，升温较慢，经过两次排气，当开始计时时料温应该比较高了，我这儿一般控温后保持两小时，效果不错；而采用高压锅炉供气，气压上升的很快，开始计时时料温可能偏低，控制3个小时应该是合理的。
    在接种箱中我接母种、原种一般用火焰封口，而接栽培种或栽培袋时仅用于灼烧接种工具及菌种瓶口，然后熄灭酒精灯，还菌种时再点。如果一直保持燃烧，到后面点也点不着了。
   

lsy6560483

QUOTE:

以下是引用那在2010-4-26 20:57:31的发言：
我觉得母种细菌污染与冷凝水无关，与操作和环境洁净度有关吧。我做菌种两年了，母种从来没有出现过细菌污染，应该不会是上帝眷顾吧。我经常是今天摆好斜面，第二天就转管，斜面的冷凝水特别多，有时只是担心水会把菌块淹死，所以把斜面管口抬高一些。注意棉塞打紧些，慢速降温，在使用之前，封棉塞头的报纸或牛皮纸不能去掉（防尘等）。仅个人生产见得。

我做试管在培养基定型后，马上就接，冷凝水之多可想而知，但很少发生细菌污染。

lsy6560483

很赞赏南湖春的求实精神，但我有一个疑问，试管培养基是在高压状态下灭菌的，而高压是通过蒸汽来完成的，而且在蒸汽气压的变化时，高压蒸汽已穿透棉塞，我无法认同棉塞是在进行干燥灭菌。

shijian

QUOTE:

以下是引用脱毒灵在2010-4-27 21:12:33的发言：
     王老师提的问题看似幼稚，其实切中了中国几十万制种者疑虑，母种中的细菌从何来？
     王老师说有冷疑水的试管容易观察到细菌污染，这是不挣的事实！
     我做木屑培养基灭菌试验时，无冷疑水的试管接入木屑麸皮培养基却经常看不到细菌斑点！我曾为此大伤脑筋！后来改成把有大量冷疑水的试管接入灭菌后的木屑麸皮培养基，结果大部分可看到细菌斑点，再后来干脆往试管倒无菌水，两三天就100%浮上了细菌块！
     幸有黄老师关于细菌有鞭毛，容易在有冷疑水的试管扩散开来，而没有冷疑水的试管就相对不容易扩散开，这个解释使我毛塞屯开，过去无菌论害人不浅，而相对论，优势论才是技术人员的正道！
     第一贴你死我活地争了三年！等于抛块砖，看到讨论还是手痒，现在各位老师都在，好夕会有个结果的，我就不多说了，现在忙着研发机械去了！

   赞赏 叶老师扬长避短、实业惠及菇农，一般菇农只能发现表象，理论上不存在优势，还是盼望你的高效率机械早日粉墨登场。

南湖春

   1.细菌是第一污染源的结论我不赞成。对食用菌生产危害最大的是各种霉菌，最难缠的是绿色木霉（绿霉），种菇者几乎达到“谈绿色变”的程度。
   2.母种细菌污染的主要原因是灭菌不彻底、接种块带菌和无菌操作操作不严等，是不争的事实；而有冷凝水时接种块周围出现细菌菌落比没冷凝水时更易出现细菌菌落的现象也是不争的事实。该贴的目的是想探讨有冷凝水时常出现细菌污染的原因。
   3.并非所有细菌都有鞭毛，但细菌都有好水性，冷凝水的存在为细菌繁殖提供了一个适宜的繁殖环境，使得细菌能够快速繁殖，不管细菌是从哪里来的，也无论他有无鞭毛。
   4.既然通过灭菌后缓慢降温或其他措施可以减少冷凝水形成，或者灭菌后待冷凝水蒸发后再使用就不会出现细菌污染，或者有人认为冷凝水的存在对菌丝生长没有任何影响，甚至有冷凝式存在时对菌丝生长有利，大家都有避免细菌污染母种的好办法，那么再讨论这个问题就显得多余了，大家各忙各的好了。
   5.细菌不需要电镜才能观察到，在目镜10倍，物镜100倍（油镜）下就能很清楚地看到，如果想检测菌丝表面有无细菌应不是太难的事儿；如果，我说是如果，菌丝表面附着有细菌，营养完全可以从培养基中获得，如果这种细菌有寄生性，完全可以从生活的菌丝中获得营养而保持生长。微生物之间的作用是相互的，有些细菌会产生毒素抑制真菌生长，但并不是都产生抑制真菌生长的毒素，有些细菌甚至会促进真菌菌丝生长；真菌分泌物也会对细菌产生作用，在双方的对峙中，就要看真菌和细菌的种类以及他们自身的特性了。
   6.各位老师给出的原因，我在有空时设计一个小实验，等结果出来就真相大白了。
   7.我在前面的帖子中出现的“隐形污染”为“隐性污染”的笔误，请大家谅解。

田鸿

可在网上做个调查，看这个问题有多少人遇到过，比例有多高，是不是个牛角问题。什么“隐性污染”，能培养的细菌在PDA上能见到菌落，还能“隐性”吗？寄生细菌就无法培养了吗？这是个病理学问题，也是微生物学问题。细菌污染在食用菌栽培料中可“隐性”，但在斜面上可培养细菌远比菌丝生长块，接种1天就可看见菌落，这么明显的问题，还和冷凝水有关？还出现什么干斜面看不见，有冷凝水的斜面看得见，使人误解为冷凝水导致污染，还去探讨冷凝水的形成，这个问题就像文革时我看过的一个电影，大学办到农村，老师在课堂上讲什么“马尾巴的功能”，专家们肯定能对马尾巴的功能说出个1234，但类似的牛角问题现实中有必要讨论吗？！