[讨论] 母种细菌污染的原因

那

我觉得母种细菌污染与冷凝水无关，与操作和环境洁净度有关吧。我做菌种两年了，母种从来没有出现过细菌污染，应该不会是上帝眷顾吧。我经常是今天摆好斜面，第二天就转管，斜面的冷凝水特别多，有时只是担心水会把菌块淹死，所以把斜面管口抬高一些。注意棉塞打紧些，慢速降温，在使用之前，封棉塞头的报纸或牛皮纸不能去掉（防尘等）。仅个人生产见得。

南湖春

      我希望网友都发表自己的意见。我在抛出这个帖子时就说过，这个可能是众人认为是一个很幼稚的问题。既然大家都热心讨论，所以，有必要把这个帖子的内容归纳一下。统览整个帖子，应该存在两种事实：
    （1）斜面表面有大量冷凝水存在时，常规无菌操作接种后，常会表现出细菌污染；
    （2）在有大量冷凝水存在时，常规无菌操作接种后，绝对不会出现细菌污染。
     我和部分网友认为：第一种事实确实存在，但对出现的原因不能做出合理的解释。同样的灭菌、接种、培养条件下，有水就污染，没水就不污染，细菌何来？推测细菌来源有二：（1）接种块带细菌。看一下该帖中毛老师关于隐性污染的解释（我也认同）可知，外观表现良好的菌丝不一定就没细菌，只是量少，培养基相对干燥，培养温度适于真菌生长而不适于细菌大量繁殖而已。并不是“不可培养细菌”长出来了；（2）棉塞灭菌不彻底。高温使蛋白质变性是灭菌的主要原理，当菌体含水量高时，热穿透快，菌体容易被杀死；当菌体含水量低时不易被杀死。所以湿热灭菌时能在121度、15-30分钟杀死菌体，而干热灭菌需要在170度左右温度下灭菌2小时。而棉塞在灭菌过程中处于干燥还是湿润的状态？我认为是前者。棉塞上的杂菌是否被全部杀死？我不敢肯定。如果棉塞上残留的细菌随着冷凝水流到斜面上就会导致细菌污染。请注意这只是推测！！！宾州大学封口用的好像不是棉塞，15分钟灭菌彻底是有可能的。田鸿老师帖中说的棉塞浸湿再烘干塞上，仍然是干棉塞，其中的杂菌杀灭彻底没有仍需推敲。
      部分网友在含有冷凝水的斜面上培养母种就没见过细菌污染，值得学习，不过没见过也不能说这种现象就不存在，而且将这种污染归结为接种操作不严我觉得还是没有太强的说服力。
      论坛是大家畅所欲言的地方，有疑问大家互相讨论，理越说越明，目的只有一个，怎样避免污染，减小损失。
      希望把争论变成讨论。说句笑话，我又不卖药！
      三人行必有我师！我不会倚老卖老，而且自认为还不老。论坛兴旺是百姓之福，能为种菇者解释一些现象、解决一点难题是做教师的本分。
      与大家共勉！
                                      
      
     

发酵罐

QUOTE:

以下是引用南湖春在2010-4-25 23:14:32的发言：

1.孢子是谁的孢子？细菌还产生孢子？
2.外观看似无细菌污染的母种其实可能隐藏着细菌。组织分离后获得的F0代母种为何不能直接接原种？
3.棉塞透气，内外气压平衡，何来倒流？反倒是硅胶塞透气差，可能会出现倒流。300多多度的火焰封着试管口，细菌耐热胜过孙悟空？超净台、接种箱合格的话，管口哪来那么多细菌？
4.要表达的是棉塞无菌还是有菌？
5.原种高压2小时足矣，何必熬3个时辰？常压3个时辰不足；

对不起，我误以为这只是个小问题。
我怕老师误解，我还是申辩一下吧。
试管菌落的分布有时不规则，并不在接种块周围，这种情况菌种带菌的可能性就小了。
就因为棉塞透气，所以才倒流，因为棉塞占据试管空间，起码棉塞内部夹杂的空气会留在试管内，它并没有经过火焰啊？可能我的表达不行让您误解，再说火焰封口也并不绝对，我并不用它封口，只用来烧管口和工具，当然这是我的事，没有代表性，不能学习我，我只觉得人工的操作并不能做到完全封口反而加速了紊乱气流，还有书上竟说，灯焰周围15公分是无菌区，没想到蘑菇书还引用科幻手法。
按科学家们的理论原种一小时就足够了，的确也照样可以生产蘑菇，我的在3个小时，这是我做罐种得到的教训，国内一家知名的研究所外售棉壳原种达到4个小时。我说这些不想误导别人，经验积累是自己的事，但有一点我想负责任的说，麦粒种要达到3小时，但不超过3小时为好。
很显然干棉塞半小时不能有效灭菌，也是共识，而且还有必然的二次污染，但为什么讨论其他要避开这首当其冲的因素呢？起码我认为这是首要的污染源。
假如接种箱是百级哪怕十级无菌，只需几十个棉塞的拔插就超过万级了，这个试验最好做。

lsy6560483

我赞成田鸿老师的观点，也佩服发酵罐实践经验！！

ykjykj

有冷凝水的试管比没冷凝水的试管细菌更容易污染，是一个不争的事实

lsy6560483

有点意思，不过观贴很有意思的。。。。。。

lsy6560483

我想问一下楼主，细菌是否跟着冷凝水的流动而移动？真菌能不能？

lsy6560483

楼主，我说的是细菌个体是否可以跟着冷凝水的流动而移动。

lsy6560483

有冷凝水的培养基，无菌操作不严带入的细菌会很快随着冷凝水移动到培养基的各处，我想楼主是当老师的，在这方面应该认同这一观点的。

lsy6560483

既然细菌可以跟着冷凝水的流动而移动，所以你说的有冷凝水的试管易污染的观点似乎可以成立？