[讨论] 母种细菌污染的原因

钟宪海

香菇栽培袋接入的菌块总有少量死穴????????????????啥原因????????????

发酵罐

QUOTE:

以下是引用shijian在2010-4-29 8:06:45的发言：

    百花齐放百家争鸣奠定了华夏民族璀璨的文化内涵、儒家、道家、兵家.....如同珍珠般点缀了辉煌的历史。相信论坛每一次讨论碰撞都会使数万坛友收获颇丰，理性商讨、辩解、争论，交流，感激众位好友普及基础知识、辨明是非，感谢王老师。

大哥您是个文化人。

daipch

个人觉得主要是操作问题，另外也有棉塞湿的原因

南湖春

 

母种细菌污染原因分析（2）

3 结果

3.1 处理1、处理2母种培养基中出现较多冷凝水，而处理3未见冷凝水。

3.2 母种接种，第一次试验由学生操作，处理1的7支试管中有3支严重细菌污染（见图1）。第二次由老师亲自操作，3组中只有处理1的细菌污染一支，而且远离接种块。（图2-1，图2-2）。处理2（图3）和处理3（图4）无细菌污染。

3.3 棉塞检验结果为，处理1棉塞（内）（图5）、棉塞（中）（图6）、处理2棉塞（内）（图7）、棉塞（中）（图8）、棉塞（外）（图9）、处理3棉塞（内）（图10）、棉塞（中）（图11）、棉塞（外）（图12）均无污染，仅处理1棉塞（外）（图13）的一个平板中出现细菌严重污染。将芽孢染色，该细菌为产芽孢的杆状细菌。

3.4 冷凝水培养结果为，所有平板未见杂菌污染，图14为处理1中的冷凝水培养结果，图15为处理2中的冷凝水培养结果。倒过冷凝水的试管中也未见细菌污染（图16）。

3.5 菌种是否带菌检验结果为，所有平板未出现细菌污染（图17）。

3.5 空白培养结果为，所有平板未出现细菌污染（图18）。

4. 小结

4.1 接种后细菌污染有可能来源于种源污染或无菌操作不严；

4.2 冷凝水中不存在细菌；

4.3灭菌后棉塞内部不含细菌。但在试管口外或靠近试管口的的部分表面可能有细菌，所以接种时要在拔掉棉塞后将试管口进行灼烧。

    实验设计很粗放，错漏之处请不吝指正。

南湖春

 

母种细菌污染原因分析（1）

1 实验目的：分析母种细菌污染原因；探讨污染细菌来源；确定棉塞是否彻底杀菌。

2 实验设计：

2.1 冷凝水对母种生长的影响：PDA培养基灭菌后，母种培养基设3个处理。处理1为灭菌后直接排气后，取出摆放斜面；处理2为棉塞烘干后摆放斜面；处理3为培养基冷却至60℃后摆放斜面。在超净工作台上接入上述3组斜面培养基中，25℃培养4天，观察菌丝生长情况及细菌污染情况。每组接种7支试管。

2.2棉塞灭菌是否彻底：接种前，取处理1、处理2和处理3的母种培养基1支，去除包扎的报纸，用无菌剪刀剪去试管外的棉塞，分别取试管内残留部分的棉塞的外部、中部、内部的少许棉花在牛肉膏蛋白胨平板表面拖动，最后置于平板中央。设3次重复。在35℃温箱中培养4天，观察有无细菌污染。

2.3冷凝水中是否含有杂菌：将处理1和处理2中的冷凝水倒入牛肉膏蛋白胨平板，置于35℃温箱中培养4天，观察有无细菌污染。设3次重复。倒过冷凝水的试管和平板一起培养。

2.4 菌种是否带菌：将平菇母种接种于牛肉膏蛋白胨平板中央，置于35℃温箱中培养4天，观察有无细菌污染。设3次重复。

2.5 空白对照：将倒好的牛肉膏蛋白胨平板不接种在35℃温箱中培养4天，观察有无细菌污染。设3次重复。

南湖春

图1是第一次接种时7支试管中细菌严重污染的3管。
图2-1中自上而下第三支试管斜面顶端有细菌污染，图2-2为2-1的放大。
图13 中上面的平板棉花周围为细菌污染，芽孢染色后观察为一种产芽孢的杆状细菌。
其他试管或平板中均无杂菌污染。

珍菌

4. 小结

4.1 接种后细菌污染有可能来源于种源污染或无菌操作不严；

4.2 冷凝水中不存在细菌；

4.3灭菌后棉塞内部不含细菌。但在试管口外或靠近试管口的的部分表面可能有细菌，所以接种时要在拔掉棉塞后将试管口进行灼烧。

所以说“实践是检验真理的唯一标准”；“事实胜于雄辩”

myb

认同王老师的实验结果！科学就要这样求真务实！

zxddcm

我用棉花做试管怎么没有你们所说的那么多污染，我每次有成功率基本都在97%以上，很多时候是100%。
我认为有无冷凝水并不影响试管的好坏。首先，升压前放它15分钟的冷气。其次，灭菌压力要足，时间严格控制在30M。再次，如果有冷凝水的试管接完种后一定不要平放，要坚放于恒温箱中，菌种生长一段时间冷凝水自然消失后再平放。如上只是本人经验，至今屡试不爽。

lsy6560483

QUOTE:

以下是引用zxddcm在2010-5-13 21:04:30的发言：

我不同意以上观点，即使有冷凝水，但是如果你的灭菌没有问题，你的接种操作没有问题，那你试管中的冷凝水它纯粹就是100%的无菌水，那么细菌污染从何而来？所以当你的试管中出现如星星一样的菌落时你就得从你的前两方面找原因了！！

把原文理解明白了再说好吗?