[讨论] 母种细菌污染的原因

lsy6560483

赞赏南湖春老师的求实精神！

zxddcm

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以下是引用脱毒灵在2010-4-29 6:49:17的发言：
细菌引起菌种退化？

我认为原文应该理解为：细菌引发食用菌产量的减少更为贴切

zxddcm

QUOTE:

以下是引用蕈苑在2010-4-27 9:27:22的发言：
 我认为：
      一、冷凝水的产生，是由于培养基中的水分受到高温由液态升华为汽态后，再经过降温，又从汽态冷却成为液态，从而附着在试管内壁与培养基表面，如同蒸馏水的产生一样，在试管内，是无菌状态的。
     二、棉塞虽然经过灭菌，但棉塞中含有大量的纤维素，当棉塞潮湿时，由试管外部也有可能感染细菌。
     三、细菌的入侵有以下途径：
       1、接种物 接种物本身含有污染源，当接种物被冷凝水接触或浸泡时，冷凝水成为细菌繁殖的温床。
       2、接种工具 接种工具灭菌不彻底，当接种工具接触冷凝水后，为冷凝水接种了细菌芽孢。
       3、接种环境 接种环境灭菌不彻底，在无菌操作时，细菌芽孢从空间进入试管，在冷凝水中繁殖。
由上所知，可采取以下措施降价或避免试管中的细菌污染：
    一、冷凝水不是细菌的污染源，所以，只要灭菌达到要求，试管中有冷凝水可以使用。
    二、棉塞改用化纤棉，即透气双过滤空气，可大大降低从棉塞的污染源。
    三、接种空间与试管灭菌一定要达到无菌要求。
    四、冷却后的试管直立放置，让冷凝水沉到试管底部。
    五、接种操作时，试管口略上扬，让冷凝水沉到试管底部，杜绝冷凝水接触接种物。
    六、接种工具一定要用酒精灯烧红、冷却后再使用。
    七、接种操作时，试管口一定要在酒精灯火焰外围2.5CM范围无菌区内，封锁外源污染 。
实践证明，如果能做到以上几点，即使是当天灭菌，当天使用，试管内有大量的冷凝水产生，也不会在试管内造成细菌污染。
    以上拙见，大家指正。

严重同意以上观点。我也是这样做的。不过我再补充一点：接种后冷凝水消失之前试管坚着培养

钟宪海

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以下是引用南湖春在2010-5-13 16:58:19的发言：
图1是第一次接种时7支试管中细菌严重污染的3管。
图2-1中自上而下第三支试管斜面顶端有细菌污染，图2-2为2-1的放大。
图13 中上面的平板棉花周围为细菌污染，芽孢染色后观察为一种产芽孢的杆状细菌。
其他试管或平板中均无杂菌污染。

感谢老师!棉塞可以用,但是得十分小心!

zxddcm

QUOTE:

以下是引用lsy6560483在2010-4-26 20:16:02的发言：
既然细菌可以跟着冷凝水的流动而移动，所以你说的有冷凝水的试管易污染的观点似乎可以成立？

我不同意以上观点，即使有冷凝水，但是如果你的灭菌没有问题，你的接种操作没有问题，那你试管中的冷凝水它纯粹就是100%的无菌水，那么细菌污染从何而来？所以当你的试管中出现如星星一样的菌落时你就得从你的前两方面找原因了！！

lsy6560483

南湖春老师，我想问一个问题，这个问题困扰了我很长的时间了，我自己是无法通过实验看出结果了，希望在这里能得到老师的解答。细菌的一个个体细胞（仅仅是一个细菌细胞的个体）接到母种培养基上几天可以看到。有无冷凝水两种情况的观察结果。

lsy6560483

不好意思，并不是想钻牛角尖，只是想要明白一个问题。

我心飞翔A

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以下是引用南湖春在2010-5-13 16:53:43的发言：
 

母种细菌污染原因分析（2）

3 结果

3.1 处理1、处理2母种培养基中出现较多冷凝水，而处理3未见冷凝水。

3.2 母种接种，第一次试验由学生操作，处理1的7支试管中有3支严重细菌污染（见图1）。第二次由老师亲自操作，3组中只有处理1的细菌污染一支，而且远离接种块。（图2-1，图2-2）。处理2（图3）和处理3（图4）无细菌污染。

3.3 棉塞检验结果为，处理1棉塞（内）（图5）、棉塞（中）（图6）、处理2棉塞（内）（图7）、棉塞（中）（图8）、棉塞（外）（图9）、处理3棉塞（内）（图10）、棉塞（中）（图11）、棉塞（外）（图12）均无污染，仅处理1棉塞（外）（图13）的一个平板中出现细菌严重污染。将芽孢染色，该细菌为产芽孢的杆状细菌。

3.4 冷凝水培养结果为，所有平板未见杂菌污染，图14为处理1中的冷凝水培养结果，图15为处理2中的冷凝水培养结果。倒过冷凝水的试管中也未见细菌污染（图16）。

3.5 菌种是否带菌检验结果为，所有平板未出现细菌污染（图17）。

3.5 空白培养结果为，所有平板未出现细菌污染（图18）。

4. 小结

4.1 接种后细菌污染有可能来源于种源污染或无菌操作不严；

4.2 冷凝水中不存在细菌；

4.3灭菌后棉塞内部不含细菌。但在试管口外或靠近试管口的的部分表面可能有细菌，所以接种时要在拔掉棉塞后将试管口进行灼烧。

    实验设计很粗放，错漏之处请不吝指正。

此主题相关图片如下图10 处理3，棉塞（内）-1.jpg：


此主题相关图片如下图11 处理3，棉塞（中）-1.jpg：


此主题相关图片如下图12 处理3，棉塞（外）-1.jpg：


此主题相关图片如下图13 处理1，棉塞（外）-1.jpg：


此主题相关图片如下图14 处理1，冷凝水-1.jpg：


此主题相关图片如下图15 处理2，冷凝水-1.jpg：


此主题相关图片如下图16 倒出冷凝水的试管-1.jpg：


此主题相关图片如下图17 检验菌种是否带菌-1.jpg：


此主题相关图片如下图18 空白对照-1.jpg：

南湖春老师的探索和求真的精神让我折服。

南湖春

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以下是引用lsy6560483在2010-5-13 22:19:51的发言：
南湖春老师，我想问一个问题，这个问题困扰了我很长的时间了，我自己是无法通过实验看出结果了，希望在这里能得到老师的解答。细菌的一个个体细胞（仅仅是一个细菌细胞的个体）接到母种培养基上几天可以看到。有无冷凝水两种情况的观察结果。

细菌生长速度很快，在35度培养，生长速度快的品种，1天就可以看到明显的菌落，25度培养1-2天也可看到。在无冷凝水处细菌呈分散的菌落，如图3；如果有冷凝水且细菌污染，会加速细菌的移动，很快会连成一片称为菌苔。如图1状。

lsy6560483

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以下是引用南湖春在2010-5-14 9:50:20的发言：

细菌生长速度很快，在35度培养，生长速度快的品种，1天就可以看到明显的菌落，25度培养1-2天也可看到。在无冷凝水处细菌呈分散的菌落，如图3；如果有冷凝水且细菌污染，会加速细菌的移动，很快会连成一片称为菌苔。如图1状。

一个细菌的个体是很小很小的，即使是20分钟繁殖一次，要繁殖多长时间才可以让人看到由一个细菌个体繁殖起来的菌落呢?我认为菌落的扩展可并不是按简单的几何级数增加的方式进行的，因为细菌在自身繁衍的同时细菌个体就之间的相互影响就妨碍了细菌个体对空间的占领，我现在只想知道一个细菌个体繁衍多长时间后人们可以观察到细菌的存在。记得在大学的时候，曾经做过检测1g土壤中含有多少细菌的测定，时间快过去30年了，一切都很模糊了，当年的老师早已断了音信，现在见到您，感到很亲切，以后可能经常会请教老师。在细菌的接菌过程中，人们接到培养基上的细菌绝不会是一个，而且接种点人们人们就可以看见了，接种点上的细菌个体要有很多很多，人们自然会很快见到菌落的，如果是一个细菌个体在干燥的食用菌培养基上多长时间可以看见呢？