有关菌种提纯的问题

luzhln

是的，我们搞生产的是效益第一，只要有好菌种就行。

conepeng

先用划线培养，看看究竟是被哪种细菌污染了啊，然后对症下药啊！！，实在没办法，脱毒培养啦！！！

tk830803

你们好，鸡枞可以人工栽培吗？如果可以在那可以学到？谢谢

小蘑菇

在长期的食用菌研发工作中，笔者及广大菇农朋友深切地感受到这样一个现实问题：即每当一个新品种（菌株）选育成功，应用于生产后，少则一二年，多则五六年即已“退化”，轻则表现发菌慢、产量低，重则表现为抗性差、发病率高。如何能抑制菌株的“退化”速度、还菌种自身原来的生物学特性、恢复其生产性状呢？经过对脱毒土豆、脱毒地瓜以及脱毒花卉的生产效果考察以及方法的类比，根据食用菌菌种的生产规律及其特殊性，设计并进行了“食用菌菌种脱毒”的研究，脱毒菌种经在十几处食用菌生产基地的广泛中试，证明效果良好，可以进行产业化推广。 　　一、菌种脱毒的技术程序 　　1、菌种脱毒的设计原理。 　　所谓菌种脱毒，就是采用先进的尖端分离技术、配合对成熟菌丝体不同阶段不同形态自然生成物的分离技术以及选用不同基质使接入种有条件进行选择性生长，并经2～4个循环后，使该菌种彻底摆脱原携病毒、病菌，恢复其原本生物特性。根据该定义，研究采用了液体基质→秸秆基质→液体基质→秸秆基质的设计，根据品种的不同，反复2～4次循环，并有意令培养基处于不稳定即所谓富养——贫瘠的交替条件下，通过一系列往复操作，使菌种在“脱”掉原携病毒病菌的前提下，自然恢复和产生较强抗性，从而达到脱毒后的菌种具有较原菌种抗逆、抗病等性状更强的生产性状的目的。 　　2、菌种脱毒的技术过程。 　　菌种脱毒的操作本身并不复杂，但需花费较长时间，并需严格控制脱毒时机和操作，主要过程及要求为： 　　（1）必须按照“绿色食用菌”的技术要求配制培养基。首先，在进行组织分离及尖端分离时，配制的斜面及平板培养基，应当较常规生产用配方的营养相对贫乏一些，基本配方为：土豆150克，木屑30克，蔗糖15克，琼脂粉10克。其次，在转接秸秆（或棉壳）基质时，该培养基可常规操作，基本配方为：棉壳1250克，麦麸125克，木屑250克，石膏粉250克，尿素7克，水2200克。上述培养基营养相对贫乏，食用菌菌丝较难发展，但某些病菌也很难发展，但在该种条件下，相对而言，食用菌菌丝较有生长优势，待再次进行分离操作时，利用菌丝尖端远离病菌、病毒的条件将其“甩”在原基质中而避免重新带入新的培养环境中，从而达到逐步脱毒的目的。 　　（2）常温培养，并创造相对不适宜的温度等条件，利用食用菌的生长优势，达到脱毒的目的。一般情况下，可采取偏低温度的条件，使食用菌菌丝能够缓慢生长，但某些病毒、病菌无法萌动；但在具体脱毒操作过程中，可根据菌种的品种特性及实际条件实施操作；比如金针菇菌种的脱毒，由于金针菇属低温菌，其子实体在15℃以上条件时即表现较差，相应某些病菌病毒也易在较低温度时对其形成侵染，故在初次脱毒分离时，应将培养温度调控至25℃～30℃，转接时再调至15℃以下；第二循环分离脱毒时，继续维持15℃以下的条件，但在转接时则需重新调至25～30℃；第三循环分离脱毒时，仍维持25℃～30℃，转接后则降至15℃以下条件进行培养；如此经高——低——低——高——高——低的较大温差，造成了使病菌、病毒难以适应的温度条件，从而达到脱毒之目的。但在一般平菇菌种的脱毒操作中，考虑一般生产者无法对温度实施调控，故可进行常温培养，只要操作认真、细心，并注意观察和取舍，均可实现脱毒目的。 　　（3）菌种脱毒采用的是“尖端”脱毒理论，因此，应适时、及时地进行分离操作，否则，一旦超过时限，病菌病毒便会“跟踪前进”，使脱毒工作前功尽弃。所谓尖端分离技术，即以菌丝体生长的最末梢或子实体的末梢组织为分离物体进行的分离操作，其基本根据是：随着生物体内细胞的不断分裂，生物体自身才能不断膨大，即不断生长，其末梢组织属于新生组织的“前沿地带”，理论上认为，该组织与生物体自身携带的病菌病毒之间的距离较大，故脱毒效果较为理想。一旦某环节无故延长时间，则很难保证脱毒效果。 　　（4）脱毒操作需连续进行，中间不得有停顿、保存等过程。如前所述，菌种脱毒是在分离——再分离的操作中实现的，但其生物体的培养，则是在不同基质（不同级别）的相互转换过程中实现的，如培养皿或试管菌种转入菌瓶，由菌瓶再转入培养皿或试管等。该过程应连续操作，期间应安排好工作程序，如果因时间或其它条件无法完成本次操作，或将某级生物体进行冰箱保存时，则难以达到脱毒目的。 　　二、脱毒菌种的生产优势及其发展前景 　　1、菌种脱毒后，恢复其原有生物学特性，无论在品种推广还是在菇农生产中，脱毒菌种将彻底保持品种的“清白”。如过去个别单位在推介品种时大力宣传是“黑蘑菇”，而菇农却种出了“白蘑菇”，这其中排除“人为操作”原因外，与菌种带菌带毒进入生产环节的关系很大，而经脱毒后的菌种，永远不会发生上述事情。 　　2、菌种脱毒后，抗逆性明显增强。包括对温度、湿度等外界环境条件的抗性，以及以某些人为因素如通风不及时、通风量不足等不良生长条件的抗性等，抗逆性增强的重要标志是：在相对管理比较粗放的情况下“照样长出好蘑菇（菇农语）”，这是对脱毒菌种的真实写照。

小蘑菇

平菇孢子分离复壮技术

同一平菇品种经过四年以上栽培就会表现出一些退化现象。如出菇迟，长势弱，转潮慢，产量不高等。通过平菇有性繁殖所产生的孢子进行母种繁殖是解决种性退化的一条有效途径。因平菇子实体孢子弹射量大，接种操作简易，在栽培专业户中推广孢子分离提纯复壮技术是可行的。 １．母种孢子分离与接种 　　（１）采菇。选择菇体形态好，生长势健壮，并能代表该品种性状接近成熟的平菇子实体，采摘一丛或两丛作为复壮用种菇拿回室内备用。要求所采的子实体菌盖边缘稍卷或已接近平展。 　　（２）装置与灭菌。用０．２％新洁尔灭清洗干净３个１ ０００毫升烧杯和３个培养皿，烘干水分后将培养皿放入烧杯底部。切取菌盖长达７～９厘米上层或中层的一朵平菇子实体，用药棉蘸７５％酒精轻擦菌盖和菌柄后，将菌褶朝下放入烧杯中的培养皿中?如有插菇钢丝架更好?。此操作完成后在烧杯口沿上盖好用无菌水滴湿的４层沙布，上面再盖一层白纸，用皮筋扎口，以次类推连同３个同样处理的烧杯一起放入接种箱。接种箱中另放入３０～４０支ＰＤＡ试管培养基，接种铲、镊子酒精灯等工具，用１０毫升甲醛加６克高锰酸钾混合后对接种箱进行熏蒸消毒灭菌。 　　（３）接种与培养。放入接种箱用于孢子分离的平菇，经过８～１２小时后就有孢子弹出，一般放置１昼夜培养皿中就有厚厚一层白色孢子印，这时要及时进行接种。接种时双手用７５％酒精擦洗后就可进行。先取掉烧杯口上覆盖的纸和纱布，再用镊子夹出平菇体，取出培养皿用左手食指和母指夹住皿体，再取一支试管培养基用左手小指和无名指夹住。右手持接种铲竖着在酒精灯上灼烧进行干热灭菌，待冷却后用右手小指及鱼际拔出试管棉塞，用接种铲从培养皿中央铲取一些孢子接在试管培养基中央，随即塞上棉塞即可。一朵菇体弹射的孢子量可接种１０支以上试管种。接种完成后贴上标签放入２５℃左右的恒温箱中培养。培养过程中，前３～４天为孢子定植期，外表看不出任何变化，７天以后孢子开始萌发并在四周长出白色绒毛状菌丝体，１６～１８天左右菌丝布满培养基面，即得纯菌丝母种。如有污染管应及时弃除。 ? 平菇孢子分离复壮技术 　　同一平菇品种经过四年以上栽培就会表现出一些退化现象。如出菇迟，长势弱，转潮慢，产量不高等。通过平菇有性繁殖所产生的孢子进行母种繁殖是解决种性退化的一条有效途径。因平菇子实体孢子弹射量大，接种操作简易，在栽培专业户中推广孢子分离提纯复壮技术是可行的。 １．母种孢子分离与接种 　　（１）采菇。选择菇体形态好，生长势健壮，并能代表该品种性状接近成熟的平菇子实体，采摘一丛或两丛作为复壮用种菇拿回室内备用。要求所采的子实体菌盖边缘稍卷或已接近平展。 　　（２）装置与灭菌。用０．２％新洁尔灭清洗干净３个１ ０００毫升烧杯和３个培养皿，烘干水分后将培养皿放入烧杯底部。切取菌盖长达７～９厘米上层或中层的一朵平菇子实体，用药棉蘸７５％酒精轻擦菌盖和菌柄后，将菌褶朝下放入烧杯中的培养皿中?如有插菇钢丝架更好?。此操作完成后在烧杯口沿上盖好用无菌水滴湿的４层沙布，上面再盖一层白纸，用皮筋扎口，以次类推连同３个同样处理的烧杯一起放入接种箱。接种箱中另放入３０～４０支ＰＤＡ试管培养基，接种铲、镊子酒精灯等工具，用１０毫升甲醛加６克高锰酸钾混合后对接种箱进行熏蒸消毒灭菌。 　　（３）接种与培养。放入接种箱用于孢子分离的平菇，经过８～１２小时后就有孢子弹出，一般放置１昼夜培养皿中就有厚厚一层白色孢子印，这时要及时进行接种。接种时双手用７５％酒精擦洗后就可进行。先取掉烧杯口上覆盖的纸和纱布，再用镊子夹出平菇体，取出培养皿用左手食指和母指夹住皿体，再取一支试管培养基用左手小指和无名指夹住。右手持接种铲竖着在酒精灯上灼烧进行干热灭菌，待冷却后用右手小指及鱼际拔出试管棉塞，用接种铲从培养皿中央铲取一些孢子接在试管培养基中央，随即塞上棉塞即可。一朵菇体弹射的孢子量可接种１０支以上试管种。接种完成后贴上标签放入２５℃左右的恒温箱中培养。培养过程中，前３～４天为孢子定植期，外表看不出任何变化，７天以后孢子开始萌发并在四周长出白色绒毛状菌丝体，１６～１８天左右菌丝布满培养基面，即得纯菌丝母种。如有污染管应及时弃除。 ?

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小蘑菇

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食用菌的菌种怎样标记？

食用菌的菌种怎样标记？ 标签是菌种的重要标志，如果不贴标签或标签写不标准，可能造成菌种错乱，给制作者和使用者都带来麻烦，甚至造成经济损失。 一、标签规格与贴法：标签规格一般有两种：菌种袋和菌种瓶的大标签6×4厘米，试管的小标签3×2厘米。标签粘贴的位置，应在距离管口或袋口或瓶口2—5厘米处。标签要求剪裁齐整，粘贴端正。常用化学粘胶水或加防腐剂的浆糊粘贴较好。塑料袋菌种可用白色医用胶布或牛皮纸胶布作标签。 二、标签写法：科研使用或母种、原种应填写详细标签，短时期使用的生产种可写简明标签或用标签笔写上标签代号也可，减少工作量，适应生产的需要。详细标签第一横行，从左至右（1）菌种名称：可写菌种拉丁文学名的第一或第一、二个字母，第一个字母用大写，或写中文字。如L（香菇）、Ag（双孢蘑菇）、V（草菇）、Ar（蜜环菌）等。（2）初次分离时间，用阿拉伯数字写年、月、日。（3）品系或菌株，包括品系间性状的差别，不同的试验处理等内容，用阿拉伯数字编代号。（4）菌种编号，包括从不同地方引入，不同的保藏方法，不同的试验处理等内容，用阿拉伯数字编写。第二横行：（1）菌种级别：如一级、二级、三级或母种、原种、生产种。（2）分离方式：孢子分离用S表示、组织分离用T表示，菌丝移植用M表示等。（3）菌种来源：分为引种、自繁、保藏，分别写引、自、保。（4）移植次数：用F字母，字母右下用小数字，表示从分离后转接的次数。第三横行：（1）接种日期，（2）制作单位，（3）菌种评价：优、良、中、差、劣五级。生产种可填写简明标签：第一横行：（1）菌种名称，（2）分离时间，（3）品系。第二横行：（1）菌种级别，（2）分离方式，（3）移接次数，（4）制作日期。第三横行，制作单位。

小蘑菇

说的好，特别是酵母菌污染后的处理。

田鸿

以下是引用zw5362在2003-10-27 13:21:15的发言： 请问版主先生： 我用苞子分离法得到的菌种，看上去长得很好，浓且白，也有菌丝的香味，但好象 是有酵母菌污染，因为在菌膜下的琼脂培养基上可以嗅到酸味。但我不能确定是不是 酵母菌或是别的什么杂菌污染。如果真是酵母菌污染，用什么方法提纯比较好。 谢谢版主先生。

有酸味不是酵母菌污染，是产酸的细菌污染。如果在实际工作中有酵母菌污染，简单的办法是用接种钩先接种在试管斜面上，培养一段时间，待菌丝爬壁后用锋利的接种铲切割菌丝转接到新的斜面上既可。或者，点接种在培养平板上，待菌落生长到一定的时候，取菌落边沿的菌丝接种在斜面上即可。

脱毒灵

常规的组织分离携带细菌病毒造成的污染成了食用菌生产第一污染源。